Fluorescencinė mikroskopija sukėlė revoliuciją mūsų gebėjime vizualizuoti ir tirti biologinius mėginius, leisdama mums pasinerti į sudėtingą ląstelių ir molekulių pasaulį. Pagrindinis fluorescencinės mikroskopijos komponentas yra šviesos šaltinis, naudojamas mėginyje esančioms fluorescencinėms molekulėms sužadinti. Bėgant metams buvo naudojami įvairūs šviesos šaltiniai, kurių kiekvienas turi savo unikalių savybių ir privalumų.
1. Merkurijaus lempa
Aukšto slėgio gyvsidabrio lempa, kurios galia svyruoja nuo 50 iki 200 vatų, yra pagaminta iš kvarcinio stiklo ir yra sferinės formos. Jo viduje yra tam tikras gyvsidabrio kiekis. Kai jis veikia, tarp dviejų elektrodų atsiranda iškrova, dėl kurios gyvsidabris išgaruoja, o vidinis slėgis sferoje sparčiai didėja. Šis procesas paprastai trunka apie 5–15 minučių.
Aukšto slėgio gyvsidabrio lempos emisija atsiranda dėl gyvsidabrio molekulių suirimo ir sumažėjimo elektrodo iškrovos metu, dėl to išsiskiria šviesos fotonai.
Jis skleidžia stiprią ultravioletinę ir mėlynai violetinę šviesą, todėl tinka įvairioms fluorescencinėms medžiagoms, todėl plačiai naudojamas fluorescencinėje mikroskopijoje.
2. Ksenoninės lempos
Kitas fluorescencinėje mikroskopijoje dažniausiai naudojamas baltos šviesos šaltinis yra ksenono lempa. Ksenoninės lempos, kaip ir gyvsidabrio lempos, suteikia platų bangų ilgių spektrą nuo ultravioletinių iki artimųjų infraraudonųjų spindulių. Tačiau jie skiriasi savo sužadinimo spektrais.
Gyvsidabrio lempos koncentruoja savo spinduliavimą beveik ultravioletinėje, mėlynoje ir žalioje srityse, o tai užtikrina ryškių fluorescencinių signalų generavimą, tačiau pasižymi dideliu fototoksiškumu. Todėl HBO lempos paprastai yra skirtos fiksuotiems pavyzdžiams arba silpnos fluorescencijos vaizdavimui. Priešingai, ksenoninės lempos šaltiniai turi sklandesnį sužadinimo profilį, todėl galima palyginti intensyvumą esant skirtingiems bangos ilgiams. Ši charakteristika yra naudinga tokioms reikmėms kaip kalcio jonų koncentracijos matavimai. Ksenoninės lempos taip pat pasižymi stipriu sužadinimu artimojo infraraudonųjų spindulių diapazone, ypač maždaug 800–1000 nm.
XBO lempos turi šiuos pranašumus, palyginti su HBO lempomis:
① Tolygesnis spektrinis intensyvumas
② Stipresnis spektrinis intensyvumas infraraudonųjų ir vidutinių infraraudonųjų spindulių srityse
③ Didesnė energijos išeiga, todėl lengviau pasiekti objektyvo diafragmą.
3. Šviesos diodai
Pastaraisiais metais fluorescencinės mikroskopijos šviesos šaltinių srityje atsirado naujas varžovas: šviesos diodai. Šviesos diodai suteikia greito įjungimo ir išjungimo per milisekundes pranašumą, sumažindami mėginio ekspozicijos laiką ir pailgindami subtilių mėginių tarnavimo laiką. Be to, LED šviesa greitai ir tiksliai nyksta, o tai žymiai sumažina fototoksiškumą ilgalaikių gyvų ląstelių eksperimentų metu.
Palyginti su baltos šviesos šaltiniais, šviesos diodai paprastai skleidžia siauresnį sužadinimo spektrą. Tačiau yra kelios LED juostos, leidžiančios naudoti įvairias įvairias fluorescencines programas, todėl šviesos diodai tampa vis populiaresniu pasirinkimu šiuolaikinėse fluorescencinės mikroskopijos sistemose.
4. Lazerių šviesos šaltinis
Lazeriniai šviesos šaltiniai yra labai vienspalviai ir kryptingi, todėl jie idealiai tinka didelės raiškos mikroskopijai, įskaitant didelės skiriamosios gebos metodus, tokius kaip STED (stimuliuotos emisijos mažėjimas) ir PALM (fotoaktyvuota lokalizavimo mikroskopija). Lazerio šviesa paprastai parenkama taip, kad atitiktų specifinį sužadinimo bangos ilgį, reikalingą tiksliniam fluoroforui, užtikrinant didelį selektyvumą ir fluorescencinio sužadinimo tikslumą.
Fluorescencinio mikroskopo šviesos šaltinio pasirinkimas priklauso nuo konkrečių eksperimentinių reikalavimų ir mėginio charakteristikų. Nedvejodami susisiekite su mumis, jei jums reikia pagalbos
Paskelbimo laikas: 2023-09-13